緩沖液準備

　　1．沖洗緩沖液（0.1M磷酸鈉，pH7.2）。要避免緩沖液中含NaCl。配好的緩沖液放置于4℃保存。

　　2．洗脫緩沖液（0.1M磷酸鈉，0.1M氟化鈉，pH7.2）。使用注射器時，洗脫緩沖液需保存在4℃。

　　3．清洗緩沖液（0.1M磷酸）。

　　4．保存緩沖液（0.02%疊n化鈉，0.1M磷酸鈉，pH7.2）。

　　蛋白層析柱的上樣和沖洗

　　1．從柱子端部拿掉塞子，保存好這些塞子，備用。

　　2．用10倍柱體積沖洗緩沖液平衡柱子。因為保存緩沖液中含有0.02%的疊n化鈉用來抑菌，為了去除疊n化物對離子的激發(fā)作用，這步預平衡是必須的。使針筒充滿沖洗緩沖液，插入柱子并把所有緩沖液推入柱子。

　　3．預冷（4℃）的細胞裂解液上柱。使針筒充滿裂解液，插入柱子并把所有裂解液推入柱子。對于1ml柱子，可以上5ml的裂解液。

　　4．用15倍柱體積沖洗緩沖液沖洗柱子。使沖洗緩沖液充滿針筒，插入柱子并把所有的緩沖液推入柱子。這步可以根據(jù)純化蛋白的需要增加額外的沖洗步驟。

　　洗脫

　　1．使針筒充滿6倍柱體積的洗脫緩沖液，先把1.5倍柱體積的洗脫緩沖液上柱。收集1.5倍柱體積的流出液，每部分0.5倍柱體積，對其進行分析。在第二部分收集液中通常會含有一些純化的蛋白。針筒也可以留在柱子上，用塞子塞住出口。

　　2．在室溫下，用洗脫緩沖液孵育柱子至少30分鐘。如果在4℃下孵育，則至少孵育12小時。

　　3倍柱體積洗脫緩沖液上柱。通常大量的蛋白會在前面五部分洗脫緩沖液中被洗脫出來。

　　清洗

　　1．用至少5倍柱體積的沖洗緩沖液沖洗柱子。

　　2．用3倍柱體積的清洗緩沖液清洗柱子。

　　3．用5倍柱體積沖洗緩沖液平衡柱子。

　　4．用2倍柱體積保存緩沖液平衡柱子；蓋好柱子并保存于4℃。

　　以上便是今天關于蛋白層析柱使用操作快速指南主要包括四個部分的全部分享了，希望對大家今后使用本設備能有幫助。